上篇講到脂質體輔料總覽，磷脂類的輔料種類很多，我們將在后面的篇章具體描述。實際上脂質體的關鍵輔料只有兩類，磷脂類和膽固醇。制備脂質體，膽固醇是不可少的輔料，除了溫敏脂質體，為了降低相變溫度時脂質體的穩定性，迅速釋放藥物，可不添加膽固醇。本篇主要介紹膽固醇的理化性質，制造及應用。

1.脂質體制劑，為什么膽固醇不可少

膽固醇屬于兩親物質，同時具有親油和親水兩種基團，但是其親油性較親水性強，與磷脂相互作用形成脂質體時可嵌入到磷脂分子之間，調節膜結構及性質，提高脂質體功能性。此外，還可調節磷脂雙分子層膜的流動性，使膜通透性降低，減少藥物滲漏；可使脂膜維持一定柔韌性，增強脂質體囊泡抗擊外部條件變化的能力；還能對磷脂的氧化有一定保護作用。膽固醇對磷脂的相變具有雙相調節作用。在相變溫度以上時，膽固醇可抑制磷脂分子中脂肪酸烴鏈的旋轉異構化運動，減少歪扭構象數量，從而降低膜的流動性；在相變溫度以下時，膽固醇又可誘發磷脂分子的脂肪酸烴鏈產生歪扭構象變化，從而阻止膠晶態出現，減少剛性，增加柔韌性。膽固醇又有類似增塑劑樣作用。在脂質體載體中提高膽固醇的比例可增加脂質體的穩定性，降低滲漏率。有報道，在制備脂質體時添加30-50%的膽固醇，可以提高脂質體的載藥量和穩定性。所以在脂質體中膽固醇不可少。

2.膽固醇的理化性質

早在18世紀人們已從膽石中發現了膽固醇，1816年化學家本歇爾將這種具脂類性質的物質命名為膽固醇。膽固醇是一種環戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇為白色粉末狀固體，室溫下穩定性較好，但對光敏感，因此應該避光、密封保存，保存得當，有效期可達5年。在三lv甲烷中易溶（1g/4.5ml），在yi醚中溶解（1g/2.8ml），在丙酮、乙酸乙酯或石油醚中略溶，在乙醇中微溶，在水中不溶（0.2mg/100ml）。

3.膽固醇的制造工藝

3.1動物組織提取

動物組織提取法是以新鮮動物內臟、骨髓及腦為原料，工藝為(1)濃縮提取:將豬牛羊腦子曬干粉碎放入浸泡罐提取,回收罐中回收,循環浸泡提取；(2)酸化:丙酮提取液濾出放入到反應罐中加入乙醇和硫酸加溫酸化；(3)皂化:酸化的膽固醇過濾放入反應罐內加入乙醇和氫氧化鈉加溫皂化; (4)清洗:皂化后的膽固醇放入反應罐中加熱,過濾,冷卻結晶。此類工藝簡單可行，是目前國內膽固醇的主要生產工藝，然而易受到原料供應的限制，且有殘留致病基因的可能。

3.2羊毛脂提取

羊毛油脂是羊毛工業的副產品，羊毛油脂中膽固醇含量較高，約10%至15%，且成品低廉來源豐富，穩定性及安全性高，國外大部分膽固醇都是以羊毛脂為原料。但羊毛脂中的膽固醇多與羊毛脂酸結合以酯的形式存在，而且膽固醇類似物很多，所以要得到純品，對技術要求很高。通過皂化工藝使膽固醇游離出來，皂化得到的膽固醇還含有大量的脫氫膽固醇、二氫膽固醇等類似物，因分子結構相似，性質相近，給分離帶來困難，成為工藝難點和關鍵點。但是，隨著對藥品安全性的重視，羊毛脂來源的膽固醇必定會逐漸取代動物內臟來源的膽固醇。江西天新藥業最新申請制備工藝如下：

(1)將羊毛脂、氧化鈣、稀釋劑、水及相轉移催化劑混合，升溫進行皂化反應，獲得羊毛脂皂化產物；

 (2)從羊毛脂皂化產物中分離獲得羊毛脂醇；

 (3)在水、乙醇、有機溶劑的存在下，使羊毛脂醇與氯化鈣接觸獲得膽固醇氯化鈣絡合物；

 (4)將膽固醇氯化鈣絡合物進行解絡，固液分離獲得膽固醇粗品；

 (5)將膽固醇粗品與低級有機酸和低級醇混合溶劑混合，重結晶獲得膽固醇成品。

4.膽固醇應該怎么選擇

膽固醇可提高脂質體的穩定性，是制備脂質體*的物質。膽固醇輔料如何挑選，必須是已通過關聯審評，注射級和高純度。

艾偉拓代理的膽固醇，為日本進口，純度高達99%，在國際上多個上市脂質體產品中長期應用。不同于大多數從動物內臟中提取膽固醇的工藝，艾偉拓供應的膽固醇采用的原料為羊毛脂，因此產品雜質相對較少，是脂質體研發和生產的*。DMF號:24780， EINECS號:200-353-2，備案登記號:F20170000106。

5.膽固醇在上市脂質體及工藝中的用法用量舉例

制備普通載藥脂質體，膽固醇(供注射用)是必須的添加物，用量一般為CHO:PC=0.3:1（摩爾比）。因PC和藥物的不同，存在膽固醇的最佳用量。在一定范圍內，脂質體的粒徑、氧化穩定性、物理穩定性與膽固醇添加量成正相關，超出范圍時，超過膜負荷，會造成部分脂質體破裂。另外，膽固醇的添加會對膜相變溫度有一定影響，臨界值以內使相變溫度降低，臨界值以上，使相變溫度升高。形成脂質體結構時，膽固醇嵌插在磷脂雙分子層上，因此可調節膜的流動性，作用隨溫度的不同而改變。在相變溫度以上，它能使磷脂的脂肪酸鏈運動性減弱，從而降低磷脂分子的流動性;而在相變溫度以下時，則可通過阻止磷脂脂肪酸鏈的相互作用，緩解低溫引起的磷脂分子流動性劇烈下降。

膽固醇已廣范應用于上市脂質體產品處方，并在多個臨床階段的脂質體項目中得以應用，如順鉑脂質體Lipoplatino ，多柔比星Doxil，兩性霉素 AmBisome，柔紅霉素DaunoXome，布卡因EXPAREL，維替泊芬Visudyne等。

膽固醇用法用量舉例如下：

5.1兩性霉素脂質體注射液(Ambisome，1990)

膽固醇用法:與磷脂和藥物一起溶于有機溶劑，旋蒸、抽真空制膜。用量：52mg/瓶

5.2多柔比星脂質體注射液(Doxil, 1995)

膽固醇用法:注入法，與磷脂一起溶于有機溶劑，快速攪拌條件下緩慢勻速注入適當濃度的硫酸銨溶液。用量：3.19 mg/mL

5.3布卡因脂質體注射液(Exparel, 2011)

膽固醇用法:與磷脂--起溶于有機溶劑，快速剪切條件下與含有布卡因的水溶液混合、乳化形成初乳。用量：8.2mg/ml

6.在近期國內脂質體研發中的磷脂與膽固醇比例

查閱了近期國內脂質體研發報道，摘錄制備工藝中磷脂與膽固醇比例舉例如下：

譚李玉等制備了杜鵑蘭酮脂質體,確定膽固醇與大豆磷脂質量比為1:8。

嵇晶等制備丹參總酚酸復合磷脂脂質體，磷脂與膽固醇質量比為3∶1。

屈曉梅等制備了舒馬普坦脂質體，卵磷脂/膽固醇比5.4:1,。

張璐等制備了紫杉醇五味子乙素脂質體，磷脂44 mg、膽固醇8 mg。

王溪淼制備卡培他濱與奧沙利鉑復方脂質體，磷脂與膽固醇之比為3:1。

邢宇等制備了銀杏內酯B脂質體， 160 mg蛋黃卵磷脂、40 mg膽固醇。

王成祥等制備了鹽酸阿霉素-黃芪甲苷脂質體，磷脂濃度為8 mg/mL,磷脂與膽固醇比為10∶1,藥脂比為1∶5。

呂佳佳等制備紫杉醇/姜黃素雙載藥脂質體，磷脂濃度40 mg/mL,磷脂-膽固醇比4∶1,藥脂比1∶40,水化介質為pH 6.5的PBS緩沖液。

膽固醇是脂質體制劑中的主要成分之一，對維持脂質體膜結構、穩定性等起重要作用。制備脂質體，必須選擇通過關聯審評，注射級和高純度的膽固醇。現在膽固醇在脂質體制造中不可少，但即將部分替代或全部替代。已有報道采用與膽固醇結構相似且具一定藥理活性的甾醇、皂苷類化合物替代脂質體處方中膽固醇，同樣能形成性質良好的脂質體。

參考文獻：

1.《藥劑輔料大全》羅明生 高天惠，四川科學技術出版社，2006年1月1日，第四十一章 脂質體載體材料

2.2015年 FDA Liposome Drug Products脂質體藥物制藥工業指南草案

3.中國藥審中心：2005年10月20日細胞毒類抗腫瘤藥脂質體制劑專題會會議紀要

4.中國藥審中心關于脂質體、乳劑注冊申報注意事項文章：審評三部 張寧  注冊分類五中的特殊情況

5.中國藥審中心2004年11月11日兩個腫瘤藥物脂質體品種的專家咨詢會

6. 2020年AVT原輔料產品（供注射用）登記情況

7. AVT：說說藥用輔料中磷脂的發展歷程是怎樣的？

8.董新電,徐勇智,王禮杰,英成浩,張先南,章根寶. 利用羊毛脂制備膽固醇的方法[P]. 江西省：CN111171098B,2021-05-07.

9. 譚李玉等人，杜鵑蘭酮的合成及其脂質體制備研究，廣州化工. 2021,49(16)

10. 嵇晶等人，丹參總酚酸復合磷脂脂質體制備工藝研究, 中南藥學. 2021,19(06)

11. 屈曉梅等人，舒馬普坦脂質體的處方與制備工藝優化，內蒙古醫科大學學報. 2021,43(03)

12. 張璐等人，RPV修飾的紫杉醇與五味子乙素脂質體處方工藝優化及體外抗腫瘤活性初步評價，中國藥房. 2021,32(10)

13. 王溪淼，錦州醫科大學，卡培他濱—奧沙利鉑復方脂質體的制備及體外細胞毒性研究

14. 邢宇等人，銀杏內酯B脂質體的處方與制備工藝研究，中國現代應用藥學. 2021,38(06)

15.王成祥等人，鹽酸阿霉素-黃芪甲苷脂質體制備工藝研究，遼寧中醫藥大學學報. 2021,23(06)

16.呂佳佳等人，紫杉醇/姜黃素雙載藥脂質體的制備工藝及制劑學性質研究，遵義醫科大學學報. 2020,43(03)

17.陳李霞等人，膽固醇在脂質體中作用及甾醇、皂苷對其替換的研究進展，中草藥，2020年第51卷第24期